Análisis de compuestos por Espectrometría de Masas: ESI by MS-QTOF, MS-ION TRAP, Orbitrap-MS, FT-ICR-MS , TSQ-MS y MALDI-TOF

Descripción del servicio

Se determinan masas moleculares y patrones de fragmentación (MSn) de masas seleccionadas mediante la obtención de espectros con MALDI-TOF/TOF y con Electrospray-Trampa de Iones (ESI-IT). Este tipo de análisis se realiza a partir de muestras en disolución a concentraciones conocidas (o muestras liofilizadas en cantidades estimadas). Las muestras pueden ser proteínas, péptidos, moléculas de pequeño o mediano tamaño, oligonucleótidos de ADN/ARN, PNAs y otros tipos de polímeros biológicos o sintéticos. El procedimiento incluye la dilución de la muestra a la concentración óptima para el análisis, la adquisición de los espectros de masas y la redacción de un informe de resultados en el que se indica el procedimiento seguido y se incluyen los espectros y las listas de las masas e intensidades obtenidas. Se recomienda que las muestras se dialicen o vayan disueltas en un tampón volátil tan concentradas como sea posible, de forma que permita su dilución con solventes adecuados. En el caso de muestras que contengan componentes (surfactantes, sales, etc.) que interfieran con el proceso de cristalización y/o ionización, para eliminar los interferentes se procederá a un procedimiento de desalado y concentración (no incluido en esta prestación), por lo que adicionalmente se deberá cumplimentar la solicitud correspondiente. Para el análisis de proteínas y oligonucleótidos se necesitan cantidades del rango de picomoles/µl y en el caso de péptidos y pequeñas moléculas de femtomoles/µl. Para el análisis con MALDI, se requerirá un volumen mínimo de unos 5 ul. A mayor tamaño de las moléculas a analizar, mayor es el requerimiento de cantidad de muestra. Para moléculas entre 0,5 - 5 KDa, el análisis se realizará en modo reflector, siendo el error estimado de 10 ppm. Para moléculas mayores de 5KDa, se utilizará el modo lineal, cuyo error estimado es de 0,01 % (100 ppm). Para el análisis con ESI, el volumen mínimo será de 25-50 µl de muestra. La resolución del equipo puede ser de hasta 0,1 uma en modo de máxima resolución del equipo. INSTRUCCIONES DE ENVÍO DE MUESTRAS 1.- La muestra en disolución o liofilizada deberá ir en un tubo de 0,5 ml, debidamente identificado con el nombre de la muestra rotulado en la tapa del mismo. 2.- Las muestras se entregarán junto con la solicitud correspondiente debidamente cumplimentada (SOLICITUD DETERMINACIÓN DE MASA MOLECULAR), donde se especificará la concentración y la composición del disolvente (o cantidad en el caso de muestras liofilizadas). 3.- Es importante tener en cuenta los diferentes contaminantes que pueden interferir en el proceso de análisis mediante espectrometría de masas (INTERFERENTES).

Descripción del servicio

Las técnicas de ESI y APCI son técnicas de ionización muy blandas que no producen apenas fragmentación en la molécula de interés. Se observan los iones (M+H)+ y (M¿H)- según se trabaje en modo positivo o negativo. Además es frecuente la aparición de iones (M+Na)+, (M+K)+, (M+NH4)+ en modo positivo y (M+Cl)¿, (M+Br)¿, (M+CH3COO)¿, (M+HCOO)¿, (M+CF3COO)¿ en modo negativo, en función de los eluyentes que utilicemos. Electrospray (ESI): moléculas lábiles o de elevada polaridad, que en disolución (con o sin aditivos) den lugar a iones. Moléculas con carga en su estructura interna son muy adecuadas para ser analizadas mediante ésta técnica. En el caso de que la molécula no posea carga en su estructura, se recurre normalmente a la adición de un ácido ó base volátil con el fin de generarlas. No es posible analizar muestras insolubles. Ionización química a presión atmosférica (APCI): compuestos de menor polaridad y una cierta estabilidad térmica. En la Solicitud de análisis se especificará la técnica a utilizar (ESI, APCI) y su modo de polaridad (positivo o negativo) pudiendo señalarse diversas modalidades si se considera necesario. Si se deja la elección al técnico, será obligatorio indicar claramente la estructura molecular que se supone para la muestra. Si no especifica lo contrario, los espectros se registrarán a distintos voltajes de fragmentación, elegidos por el técnico. Si la bibliografía recomienda para compuestos similares a la muestra el uso de una técnica, modalidad o condiciones, es muy conveniente el señalar estos datos en la Solicitud de análisis. Rango de masas: Peso molecular comprendido entre 10 y 2000 u para iones monocargados y masas mayores para aquellos múltiplemente cargados. Con esta técnica se pueden generar iones múltiplemente cargados (z >1) lo que permite abordar el estudio de moléculas con una masa molecular por encima del límite del analizador, siempre y cuando se produzca el proceso de multicarga. Disolventes: Los disolventes volátiles son los más adecuados Los preferidos: metanol, acetonitrilo y agua Evitar disolventes con altos puntos de ebullición, tales como el DMSO, que son problemáticos en la espectrometría de masas Se ruega consultar antes de hacer uso de otros disolventes y aditivos Equipos disponibles: Cromatógrafo de líquidos LCMS2020 (Shimadzu) acoplado a espectrómetro de masas con analizador tipo cuadrupolo. CARACTERÍSTICAS: Rango de masas: 10-2000 u. Fuentes de ionización: ESI APCI

Descripción del servicio

El Servicio de Espectrometría de Masas cuenta con espectrómetro de masas Esquire 6000 (Bruker), con las siguientes características: - Fuentes de ionización blandas por electrospray (ESI) , ionización química a presión atmosférica (APCI) o de Fotoionización (APPI): - Analizador de Trampa de Iones. - Rango de masas desde 20 hasta 3000 Da. - Ensayos: registros de iones en modo positivo y negativo y estudios de fragmentación (MS/MSn). El Servicio de Espectrometría de Masas cuenta con espectrómetro de masas MicroTOF-Q (Bruker), con las siguientes características: - Fuentes de ionización blandas por electrospray (ESI) , ionización química a presión atmosférica (APCI) o de Fotoionización (APPI): - Analizador de Tiempo de vuelo. - Rango de masas desde 20 hasta 3000 Da. - Ensayos: registros de iones en modo positivo y negativo, medida de ALTA resolución y estudios de fragmentación (MS/MSn). El servicio de Espectrometria de masas tiene dos espectrometros de masas MALDI-TOF, con un analizador de tiempo de vuelo y un sistema de ionización y desorción láser asistida por matriz : Bruker MicroFlex. Espectrómetro de masas MALDI-TOF Bruker AutoFlex. Espectrómetro de masas MALDI-TOF con capacidad tandem TOF/TOF mediante la técnica Lift.