TRAP-TRAP: UNA HERRAMIENTA PARA EL ANALISIS DINAMICO DE TRANSCRIPTOMAS TEJIDO-ESPECIFICOS

EL DESARROLLO DE LOS METODOS DE SECUENCIACION MASIVA HA FACILITADO ENORMEMENTE EL ANALISIS SISTEMATICO DE TRANSCRIPTOMAS EN ORGANISMOS VIVOS. LA TECNICA RNA-SEQ SE HA ESTABLECIDO COMO UNA HERRAMIENTA GENERAL PARA EXPLORAR LA EXPRESION GENICA EN CELULAS Y TEJIDOS, PROPORCIONANDO UNA MEDICION PRECISA DE LOS NIVELES DE TRANSCRIPCION A ESCALA GENOMICA. LOS COMPLEJOS PROCESOS QUE CONTROLAN EL DESARROLLO Y LA FISIOLOGIA DE LOS TEJIDOS DEPENDEN DE POBLACIONES HETEROGENEAS DE CELULAS. ESTO LIMITA LA ESPECIFICIDAD DE LOS ESTUDIOS DE RNA-SEQ A TEJIDOS QUE PUEDAN SER FACILMENTE DISECADOS IN VIVO. PARA SUPERAR ESTAS LIMITACIONES SE EMPLEAN LAS TECNICAS DE CITOMETRIA (FACS). QUE PERMITEN AISLAR POBLACIONES CELULARES PURAS. SIN EMBARGO, ESTE TIPO DE METODOLOGIA REQUIERE PROTOCOLOS SEVEROS DE DISOCIACION CELULAR QUE PUEDEN ALTERAR SIGNIFICATIVAMENTE LA EXPRESION GENICA. COMO ALTERNATIVA, SE HA DESARROLLADO RECIENTEMENTE LA TECNOLOGIA TRAP (RANSLATING RIBOSOME AFFINITY PURIFICATION) QUE PERMITE EL AISLAMIENTO ESPECIFICO DE RNA MENSAJEROS ASSOCIADOS A POLI-RIBOSOMAS MEDIANTE EL MARCAJE GENETICO DE RIBOSOMAS EN CELULAS Y TEJIDOS ESPECIFICOS. EN ESTA PROPUESTA, PLANEAMOS COMBINAR EN PEZ CEBRA LA METODOLOGIA TRAP CON METODOS CONVENCIONALES DE CAPTURA DE ELEMENTOS REGULADORES MEDIANTE TRANSGENESIS INSERCIONAL (ENHANCER-TRAP). EL OBJETIVO ES LLEVAR A CABO UN ENSAYO PILOTO PARA GENERAR LINEAS TRANSGENICAS QUE PERMITAN ANALISIS RNA-SEQ TEJIDO-ESPECIFICOS (TECNOLOGIA TRAP-TRAP). LA COLECCION DE LINEAS TRANSGENICAS RESULTANTE CONSTITUIRA UN RECURSO UNICO PARA GRUPOS TRABAJANDO EN GENETICA DEL DESARROLLO, FISIOLOGIA, O MODELOS ANIMALES. PARA PONER ESTAS LINEAS TRANSGENICAS, ASI COMO LA TECNOLOGIA EN SI, A DISPOSICION DE LOS INVESTIGADORES DE LA COMUNIDAD DE PEZ CEBRA, TRANSFERIREMOS LOS PROTOCOLOS TRAP-TRAP A LA PLATAFORMA DE VERTEBRADOS ACUATICOS DEL CABD. ESTA INSTALACION CENTRAL TENDRA LA CAPACIDAD DE OFRECER SOPORTE TECNOLOGICO A USUARIOS INTERESADOS EN EL ENFOQUE TRAP-TRAP.