CONSTRUCCION DE UN NUEVO Y VERSATIL GEN SEÑALIZADOR DE VARIACIONES EN NIVELES DE EXPRESION GENICA IN VIVO MEDIANTE TOMOGRAFIA DE EMISION DE POSITRONES (PET)

ESTA ES UNA PROPUESTA DE PRUEBA DE CONCEPTO: ESTABLECER SI LA EXPRESION DE UNA B-LACTAMASA BACTERIANA PUEDE SER UTILIZADA COMO HERRAMIENTA PARA EL SEGUIMIENTO Y LA LOCALIZACION DE CAMBIOS EN LOS NIVELES DE EXPRESION GENICA EN ANIMALES DE EXPERIMENTACION VIVOS. EL EXITO DE ESTE PROYECTO CONDUCIRA A LA GENERACION DE ANIMALES TRANSGENICOS DE GRAN VALOR EN LA INVESTIGACION PRECLINICA. LA OBTENCION DE IMAGENES IN VIVO DE FORMA NO INVASIVA ES LA HERRAMIENTA DE ELECCION EN LA INVESTIGACION PRECLINICA PARA EVALUAR LA EVOLUCION DE ENFERMEDADES Y SU RESPUESTA A LA TERAPIA. LA OBTENCION DE IMAGENES IN VIVO DE GENES MEDIANTE TOMOGRAFIA POR EMISION DE POSITRONES (PET) ES LA TECNICA ELEGIDA PARA ESTE PROPOSITO. LOS IRG DE PET ACTUALES PRESENTAN VARIOS INCONVENIENTES, SIENDO DIFICIL DETERMINAR EN QUE MEDIDA LA SEÑAL DETECTADA SE DEBE A UN CAMBIO TRANSCRIPCIONAL O DE FOSFORILACION, INDEPENDIENTEMENTE DE LA ACTIVIDAD PROMOTORA Y LA INESPECIFICIDAD DEBIDA A LA INTERACCION DEL LIGANDO MARCADO CON LAS PROTEINAS ENDOGENAS. ADEMAS, ALGUNOS DE ESTOS TESTIGOS SON ALTAMENTE INMUNOGENICOS, LO QUE LIMITA SU USO A ANIMALES INMUNO-RESISTENTES. PARA SUPERAR ESTAS LIMITACIONES PLANEAMOS DESARROLLAR UN SISTEMA IRG BASADO EN LA EXPRESION DE UNA FORMA MODIFICADA DE UNA B-LACTAMASA BACTERIANA. ES UNA VARIANTE MUTANTE EN EL CENTRO CATALITICO QUE SE UNE DE FORMA IRREVERSIBLE A LOS ANTIBIOTICOS B-LACTAMICOS. LAS CANTIDADES DE ESTA B-LACTAMASA EXPRESADAS DESDE EL PROMOTOR SE CUANTIFICARAN MEDIANTE PET, DESPUES DE LA ADMINISTRACION DE UN DERIVADO DE AMPICILINA (DOTA-AMPICILINA), DE ALTA AFINIDAD POR LA B-LACTAMASA, MARCADO RADIOACTIVAMENTE CON GALIO (68GA). PLAN DE ACCION: 1) GENERAR UNA LINEA CELULAR ESTABLE QUE EXPRESE EL GEN DE LA B-LACTAMASA BAJO EL CONTROL DEL PROMOTOR DE CITOMEGALOVIRUS (CMV); 2) INYECCION DE LAS CELULAS B-LACTAMASA POSITIVAS EN RATONES PARA GENERAR UN XENOINJERTO; 3) ADMINISTRACION SISTEMICA DE 68GALLIUM-AMPICILINA, Y 4) IMAGEN DE LA DISTRIBUCION IN VIVO MEDIANTE PET.