Separación Celular por Citometría de Flujo (Cell Sorting)

Fundamento: La citometría de flujo es una técnica de análisis multiparamétrico cuyo principio está basado en el paso de una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas a través de un haz de luz monocromatico (láser). Equipamiento: - Analizador BD FacsCalibur: 2 láseres excitación (488 y 633 nm). 4 detectores de fluorescencia - Analizador BD FacSymphony: 5 láseres excitación (355, 405, 488, 561 y 633 nm). 30 detectores de fluorescencia. Dispensador de placas acoplado de 96-384 pocillos. - Separador BD FacsAria III: 4 láseres excitación (405, 488, 561 y 633 nm). 16 detectores de fluorescencia - Bioplex 200 (tecnología luminex) lector en placa Técnicas: - Análisis complejo multiparamamétrico - Identificación de genes reporteros - Proliferación celular - Apoptosis y necrosis - Viabilidad celular - Ciclo celular - Ensayos funcionales - Análisis multiparamétrico de moléculas en solución (Bioplex) - Separación cellular - Análisis de datos con herramienta

La citometría de flujo es una de las técnicas que ha experimentado un mayor desarrollo en los últimos años. Ésta técnica proporciona datos multiparamétricos relativos a las características físicas y químicas de células o partículas en suspensión. Nuestro Servicio de Citometría de Flujo proporciona equipamiento y asistencia profesional para la realización de una amplia gama de análisis mediante citometría de flujo. Estos incluyen des del inmunofenotipaje más convencional a ensayos de biología celular (apoptosis, ciclo celular, la proliferación...), estudios de transducción de señal (fosforilación, movilización de Ca2 +), detección de moléculas solubles (citoquinas…), estudios genéticos y de ploidía. El Servicio dispone también de un separador de partículas (cell sorter) que permite la separación física de subpoblaciones con diferentes características de fluorescencia. El Servicio también proporciona asesoramiento en el diseño de experimentos, proporciona protocolos, y suminist

El servicio de citometría de flujo está diseñado como instrumento de apoyo a todos los grupos que trabajan directa o indirectamente en el área de la biología celular. Para ello las células son marcadas con sondas fluorescentes y sometidas a análisis o separación celular mediante citómetros de flujo Actualmente el servicio dispone del siguinete equipamiento y medio de trabajo: -Dos analizadores, modelos Cytoflex- (Beckman Coulter) y un espectral Aurora 4L (Cytek) -Separador (cell sorter) modelo FACSAria Fusion (Becton Dickinson), -Software específico de análisis

El Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA) es una instalación reconocida como Infraestructura Científica y Técnica Singular (ICTS) que cuenta con laboratorios y animalario de nivel 3 y 3+ (NCB3 y NCB3+) que permiten abordar estudios en condiciones de alta Seguridad Biológica. El Servicio de Citometría de Flujo es un laboratorio NCB3 equipado con un citómetro analizador BD FACSCelesta SORP y un citómetro separador BD FACSAria III. Las aplicaciones de citometría en el CISA engloban desde técnicas rutinarias para la evaluación de la respuesta inmune en animales infectados o vacunados, hasta la cuantificación y el fenotipado de subpoblaciones leucocitarias, su activación y proliferación, ensayos de citotoxicidad y de producción de citoquinas. Además, es un servicio donde se testan la mayoría de los candidatos vacunales frente a SARS-CoV-2. La separación de subpoblaciones celulares para su estudio individualizado es también posible.

El objetivo del servicio fundamentalmente es el análisis y separación de poblaciones celulares de muestras tanto animales como humanas de los distintos laboratorios del instituto y de otras entidades públicas o privadas (servicio externo) gracias a las mediciones de fluorescencia, tamaño y complejidad que nos aportan los citómetros. Del mismo modo se asesora tanto en la preparación de las muestras como en el posterior análisis de datos obtenidos.

El Instituto Cajal posee un citómetro de flujo separador modelo FACSAria de la compañía BD Biosciences. El equipo posee dos láser enfriados por aire: un láser de Argón de 488 nm con el que se pueden detectar hasta cinco fluorescencias diferentes y un láser de Helio-Neon de 633 nm que permite la detección de dos fluorescencias diferentes, lo que en conjunto permite un análisis multiparamétrico de hasta siete fluorescencias, junto con los dos parámetros de scatter (tamaño y complejidad celular). El módulo de sorting admite separación celular de alta velocidad de hasta cuatro poblaciones distintas en soportes para varios tipos de tubos, incluyendo tubos de 5 y 15 ml. Por su diseño actual, el equipo no permite separación celular en placa ni detección de muestras teñidas con DAPI/Hoechst El análisis de los resultados obtenidos en el citómetro de flujo se realiza mediante los programas FACSDiva y CAPArray de BD Biosciences.

El Servicio de Citometría de flujo del Centro Nacional de Biotecnología desarrolla su labor en el marco de los diferentes programas de investigación del centro. Además de dar servicio a los usuarios de Citometría, el personal del Servicio pone a punto los diferentes sistemas de trabajo y desarrolla nuevas metodologías antes de ponerlas a disposición de los usuarios. El Servicio da soporte técnico y tecnológico tanto a los diferentes grupos del centro que los soliciten, como a diferentes grupos del sector público o privado El Servicio ofrece: Formación y Supervisión en Citometría de Flujo y en el uso de los diferentes Citómetros del Centro. Elaboración, optimización y actualización de los protocolos . Análisis y presentación de resultados con diferentes softwares especializados. Puesta a punto de diferentes aplicaciones, Cuantificación de citoquinas solubles mediante ensayos de multiplexado. Aislamiento celular por Cell Sorting . Anticuerpos y reactivos de uso común