El compuesto debe poseer al menos un pKa en el rango 3-10 y no debe descomponerse en el rango de pH de trabajo del equipo (2-12). Cantidad de muestra: 3-5 mg por ensayo. La muestra se aportará liofilizada en un vial.
La pureza del compuesto debe ser elevada (¿ 95%) para que el ensayo sea representativo. Para realizar varios ensayos, todas las muestras deben necesariamente proceder del mismo lote.
El ensayo se realiza a una fuerza iónica similar a la de los medios biológicos, 0.15M.
El ensayo se realiza en mezclas agua-cosolvente con 0.15M de KCl. El equipo calcula el pka en tres proporciones durante el ensayo y extrapola el resultado a 100% de agua.